La molecola di siRNA blocca la produzione di proteine amiloidi interferendo con la produzione di RNA di proteine TTR anomale. Questo impedisce l’accumulo di queste proteine in diversi organi del corpo e aiuta i pazienti a gestire questa malattia.
Come funziona il siRNA per silenziare il gene?
In RNAi, piccoli RNA a doppio filamento elaborati da lunghi RNA a doppio filamento o da trascrizioni che formano anse staminali, silenziano l’espressione genica mediante diversi meccanismi: prendendo di mira l’mRNA per la degradazione, impedendo la traduzione dell’mRNA o stabilendo regioni di cromatina silenziata.
Come funzionano i siRNA?
siRNA. Gli siRNA sono altamente specifici e solitamente sintetizzati per ridurre la traduzione di specifici RNA messaggeri (mRNA). Questo viene fatto per ridurre la sintesi di particolari proteine. Si formano dall’RNA a doppio filamento trascritto e poi tagliato a misura nel nucleo prima di essere rilasciato nel citoplasma.
Come funziona l’RNAi che coinvolge siRNA?
Durante l’RNAi, il lungo dsRNA viene tagliato o “tagliato a cubetti” in piccoli frammenti lunghi circa 21 nucleotidi da un enzima chiamato “Dicer”. Questi piccoli frammenti, indicati come piccoli RNA interferenti (siRNA), si legano a proteine di una famiglia speciale: le proteine Argonaute.
Come funziona il siRNA a livello biologico?
siRNA è un breve frammento di RNA a doppio filamento che lega e scinde l’mRNA attraverso un complesso di silenziamento che induce l’RNA RISC.
In che modo il siRNA influenza l’espressione genica?
Il silenziamento genico post trascrizionale indotto da siRNA inizia con l’assemblaggio del complesso di silenziamento indotto dall’RNA (RISC). Il complesso silenzia determinate espressioni geniche scindendo le molecole di mRNA che codificano i geni bersaglio. Questa scissione si traduce in frammenti di mRNA che vengono ulteriormente degradati dalle esonucleasi cellulari.
Cosa sono i fattori di trascrizione a livello biologico?
I fattori di trascrizione sono proteine che regolano la trascrizione dei geni, cioè la loro copia nell’RNA, sulla strada per produrre una proteina. Il corpo umano contiene molti fattori di trascrizione. Così fa il corpo di un uccello, albero o fungo!
A cosa si lega il siRNA?
Molecola di RNA a filamento singolo (di solito da 21 a 25 nucleotidi di lunghezza) prodotta dalla scissione e dall’elaborazione di RNA a doppio filamento; si lega a sequenze complementari nell’mRNA e determina la scissione e la degradazione dell’mRNA.
Quanto dura il siRNA?
L’effetto più spesso durerà da 5 a 7 giorni. Tuttavia, la durata e il livello di knockdown dipendono dal tipo di cellula e dalla concentrazione di siRNA. Le trasfezioni possono essere ripetute per mantenere il silenziamento.
Qual è la differenza tra siRNA e RNAi?
La principale differenza tra siRNA e miRNA è che i primi inibiscono l’espressione di uno specifico mRNA target mentre i secondi regolano l’espressione di più mRNA. Un considerevole corpo di letteratura ora classifica i miRNA come molecole di RNAi.
Come si produce il siRNA?
Attualmente, ci sono cinque metodi per generare siRNA per studi di silenziamento genico:
Sintesi chimica.
Trascrizione in vitro.
Digestione di dsRNA lungo da parte di un enzima della famiglia RNase III (ad es. Dicer, RNase III)
Espressione nelle cellule da un plasmide di espressione di siRNA o da un vettore virale.
Qual è la differenza tra siRNA e shRNA?
siRNA si riferisce a una molecola di RNA a filamento singolo prodotta dalla scissione e dall’elaborazione dell’RNA a doppio filamento mentre shRNA si riferisce a una breve sequenza di RNA che fa una stretta curva a forcina e può essere utilizzata per silenziare l’espressione genica. Quindi, questa è la principale differenza tra siRNA e shRNA.
Cos’è il controllo siRNA?
Gli siRNA AccuTarget Positive Control sono progettati per indurre un elevato knockdown di siRNA dei loro geni bersaglio. Sono disponibili siRNA mirati a un gene endogeno (GAPDH) e un sistema reporter (GFP e luciferasi). Gli siRNA di AccuTarget Negative Control non prendono di mira alcun gene noto nell’uomo, nel topo e nel ratto.
Cosa fanno miRNA e siRNA?
La funzione principale del siRNA è mantenere l’integrità del genoma contro le molecole di RNA estraneo mentre il miRNA funziona come regolatore dei geni endogeni. Un singolo siRNA si lega a un singolo mRNA mentre il miRNA ha più siti di azione dello stesso e diverso mRNA.
In che modo siRNA e miRNA influenzano l’espressione genica?
Qui, dimostriamo che un miRNA umano codificato in modo endogeno è in grado di scindere un mRNA che porta siti bersaglio completamente complementari, mentre un siRNA fornito esogenamente può inibire l’espressione di un mRNA che porta sequenze parzialmente complementari senza indurre una scissione rilevabile dell’RNA.
Come silenziare l’espressione genica?
I geni possono essere silenziati da molecole di siRNA che causano la scissione endonucleatica delle molecole di mRNA bersaglio o da molecole di miRNA che sopprimono la traduzione della molecola di mRNA. Con la scissione o repressione traduzionale delle molecole di mRNA, i geni che le formano vengono resi essenzialmente inattivi.
Come posso migliorare il mio atterramento di siRNA?
I 4 migliori modi per rendere il tuo esperimento siRNA un successo
Scegli i reagenti siRNA appropriati e i metodi di consegna adatti al tuo tipo di cellula.
Utilizzare controlli positivi e negativi appropriati in ogni singolo esperimento.
Ottimizza le condizioni di consegna del siRNA.
Conferma il tuo knockdown a livello di mRNA usando qPCR.
Quanto tempo impiega il siRNA a funzionare?
Poiché gli siRNA raggiungono il silenziamento transitorio, gli esperimenti sono limitati a intervalli di tempo relativamente brevi dell’ordine di 2-4 giorni. Gli siRNA possono anche essere utilizzati per il knockdown di geni codificanti non proteici, come gli RNA lunghi non codificanti (lncRNA).
Come si ottimizza il siRNA?
Per ottimizzare le condizioni, transfettare le cellule bersaglio con diverse concentrazioni di un siRNA specifico per il controllo positivo scelto e per il siRNA bersaglio sperimentale. Misurare la riduzione della proteina di controllo o del livello di mRNA rispetto alle cellule non trasfettate 48 ore dopo la trasfezione.
Cosa significa siRNA?
Uno dei progressi più importanti della biologia è stata la scoperta che il siRNA (small interfering RNA) è in grado di regolare l’espressione dei geni, mediante un fenomeno noto come RNAi (interferenza del RNA).
Perché le cellule hanno RNAi?
L’RNAi si osserva principalmente nelle cellule eucariotiche, dove l’RNA a doppio filamento (dsRNA) viene utilizzato per il silenziamento genico trascrizionale (livello genico) e post-trascrizionale (livello RNA). Il silenziamento genico previene la sintesi proteica e aiuta a prevenire tumori, infezioni virali e malattie neurodegenerative.
Quali proteine sono contrassegnate per la distruzione?
Una proteina condannata viene etichettata con una catena di una proteina chiamata ubiquitina, che è come un segno molecolare che dice “distruggimi”. La proteina marcata con l’ubiquitina viene inviata al proteasoma della cellula – il compattatore di rifiuti della cellula – che scompone la proteina in amminoacidi componenti.
Qual è un esempio di fattore di trascrizione?
Molti fattori di trascrizione, in particolare alcuni che sono proto-oncogeni o soppressori tumorali, aiutano a regolare il ciclo cellulare e come tali determinano quanto sarà grande una cellula e quando potrà dividersi in due cellule figlie. Un esempio è l’oncogene Myc, che ha ruoli importanti nella crescita cellulare e nell’apoptosi.
Quali sono i due modi in cui i repressori possono interferire con la trascrizione?
Quali sono i due modi in cui i repressori possono interferire con la trascrizione?
Inibiscono l’attivazione della trascrizione. Alcuni si legano alla regione dell’attivatore e impediscono agli attivatori di legarsi al DNA, mentre altri interferiscono con le interazioni molecolari tra gli attivatori e l’RNA polimerasi.
Come si conferma il siRNA?
La specificità di un siRNA può essere determinata in modo definitivo solo osservando i cambiamenti globali nel modello di espressione genica (cioè utilizzando microarray di DNA). In questi esperimenti, più siRNA mirati a un particolare gene dovrebbero dare origine a cambiamenti “gene-specifici” nei profili di espressione.